تصویربرداری نوین

IMRI

روش تصویر برداری نوین

تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی به یک فنوتیپ قلبی در قلب موش بالغ

تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی به یک فنوتیپ قلبی در قلب موش بالغ

قیمت:160000ریال

موضوع :

تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی به یک فنوتیپ قلبی در قلب موش بالغ

فرمت : ورد

عضله ی قلب بزرگسالان برخلاف عضله ی اسکلتی تواناییِ ترمیم پس از آسیب ایسکمی را ندارد و مرگ کاردیومایوسیت ها ( قلب ) منجر به ناتوانی قلب می شود. این قضیه باعث ایجاد توجه در شناسایی انواع سلول هایی می شود که قادر به جایگزینی میوکاردِ آسیب دیده با سلول های سالم و در نتیجه افزایش عملکرد قلبی می شود. در طول دهه گذشته تکنیک های پیوند سلولی قلب دستاوردهایی را بوجود آورده و تنوع موجود در انواع سلول ها به عنوان کاندید های مفید مطرح و ارائه شدند. توجه ویژه ای در رابطه با استفاده از سلول های ماهواره ای ماهیچه های اسکلتی و مایوبلاست ها بوجود آمد زیرا این سلول توانایی و قابلیت پیوند اتولوگ دارند. قبلا نشان دادیم که بقا و تمایز برای یک ماهیچه کند انقباض با فنوتیپ مایوبلاست های C₂C₁₂ می باشد که بطور سرخ رگی و شریانی به قلب موش آزاد می شوند. کار بعدی نشان داد که علاوه بر بقای نیوبلاست در نیوکاردیومِ آسیب دیده ، اثرات مثبتی نیز روی بازسازی و عملکرد بطن چپ وجود دارد. اولین کاردیو نیوپلاستیِ سلولی انسان با استفاده از نیوبلاست های اتولوگ همراه با نتایجی دلگرم کننده اخیراً گزارش شد.

یک داوطلب ایده آل برای کاردیومیوپلاست سلولی به احتمال زیاد سلولیست که می تواند تمایز قلبی را به طور کامل تحمل کند. چنین جمعیت سلولی ممکن است در مغز استخوان بزرگسالان یافت شود. در حال حاضر پذیرفته شده که اجتماع سلول های جدا شده از مغز استخوان و توسعه یافته در شرایط آزمایشگاهی، منبع بالقوه ای از سلول های بنیادی مزانشیمیِ تمایز نیافته را نشان می دهند که می تواند منجر به افزایش انواع سلول بافتیِ همبند شود. چنین سلول های مزانشیمیِ انسانی، ابتدا جدا شده و توانایی بالقوه ای برای تمایز چندگانه توسط Haynesworth و همکارانش نشان داده شد. اخیرا سلول های مزانشیمیِ انسانی را جدا کردیم و آن ها را کشت داده و توانایی چندگانه ی آن ها را با روش های آزمایشگاهی نشان دادیم.

شواهد داخل بدن از این نظریه که : سلول های بنیادی مزانشیمی قادر به تحمل تمایز قلبی می باشد، حمایت می کند. برای مثال، اجتماع سلول های بنیادی مزانشیمی از مغزِ استخوان موش جدا شده و به عضله ی چهار سر موش تزریق می شود که نشان می دهد سلول ها می توانند به طور موضعی در دیستروفین سارکوپلاسمای فیبر ماهیچه مشارکت کنند. هنگامیکه سلول های مغز استخوان از یک موش طبیعی نر به صورت داخل وریدی به سیاهرگِ دم موش تزریق می شود و روی mdx موش ماده تاثیر می گذارد. میولوله ها در دریافت کنندگان حاوی هسته ی y-مثبت بودند. سلول های بنیادی مزانشیمی موش بعد از تزریق به فنوتیپ میوژنی تبدیل می شوند و به ماهیچه ی اسکلتی آسیب دیده ی کاردیوتوکسین برمی گردند. همچنین بعد از حرارت دادن با عامل دِمتیلاسیونِ DNA،5-آزاسیتیدین، سلول های خطیِ شبیه به سلول مزانشیمی موش به منظور بیان نشانگرهای تمایز قلبی نشان داده شد و دپلاریزاسیون غشای خود به خودی را در شرایط آزمایشگاهی ارائه دادند. به تازگی Bittner و همکارانش نشان دادند که سلول های مشتق شده از مغز استخوان می توانند به هر دو ماهیچه ی اسکلتی و قلبی در موش mdx نیرو بخشیده و این ماهیچه های خط دار، بازسازی و تعمیر مستمر را تحمل می کنند.

در نتایج گزارش شده در این جا سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی به قلب موش تزریق می شوند تا دیده شود آیا این سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی قادر به تحملِ تفکیک یا تمایزِ وابسته به محیط هستند یا نه. سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی به بتاگالاکتوسیداز چسبیده و به بطنِ چپِ موشی که نقص ایمنی دارد تزریق شدند. حیوانات در چندین نقطه ی زمانمی کشته شدند و قلب شان برای تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی انسانیِ پیوند داده شده، مورد آنالیز قرار گرفتند.

روش ها

جداسازی سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی (hMSCs)

hMSCs ها همانطور که قبلا توضیح داده شد جدا شدند. به طور خلاصه بعد از امضای رضایت نامه ی مغزِ استخوانِ خارج شده از تاجِ خاصره ی پشتیِ داوطلبانِ سالم برداشته شد و به داخل یک سرنگ حاوی 6000 واحد هپارین ریخته می شود. نمونه ی مغز با Dulbecco PBS شستشو داده شده و سلول ها پس از سانتریفیوژ در 900 گرم، دوباره بدست آمده و ترمیم می شوند. سلول های هسته شکل، شمارش شده و 1 × 10⁸ سلول های هسته ای بر روی 25 میلی لیتر از محلول Percoll در لوله ی مخروطیِ 50 میلی لیتری، بارگذاری می شوند. سلول های هسته ای از لایه ی فوقانی در دمای 20 درجه سانتی گراد و سطح میانی جمع آوری شده، با حجمِ 2 محلولِ Dulbecco PBS رقیق شده و از طریق سانتریفیوژ در 900 گرم جمع می شوند. سلول ها در DMEM ( گلوکزِ پایین ) حاوی 10 درصد FBS که برای رشد سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی انتخاب شدند، کشت می شوند. آزمایشاتی که در این جا شرح داده شده از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی که در قند خون ناشتا با 5/58 AFE بالا رشد می کنند، استفاده می شود.

حامل های آدنوویروس ها

آدنوویروس های نوترکیب که نقص ایمنی دفاعی دارند حامل ژن گزرشگر بتاگالاکتوسیداز هستند که تحت کنترل پیش برنده های فوری سیتومگالوویروس (CMV) یا پیش برنده های پایانه طولانی ویروس سارکوم Rous (CMV) هستند که از دانشگاه هسته ایِ حامل ژن ( دکترریچارد اندرسون) خریداری شده است. برای آزمایش حامل ها یاخته های بنیادی مزانشیمیِ انسانی با غلظت 10000 سلول پوشانده شد. غلظت افزایشی ویروس ها در محدوده ی بیش از 2000-100 عفونت، یک شب در سرم فاقد DMEM برای تعیین بهینه ی کارایی هدایتی، اعمال شد. روز بعد ویروسِ شناور بر سطح، حذف شد و سلول ها با تغییرات متعددِ DMEM ای که حاوی 10FBS درصد می باشد، شسته شد. دو روز لبعد، سلول ها با گلوتارآلدهید 0/2 درصد به مدت 2 دقیقه میکس شدند و رنگ آمیزی X-gal طبق دستورالعمل انجام شد. سلول های آلی بتاگالاکتوسیداز- مثبت در 10 زمینه ی میکروسکوپی (20×) شمارش شدند و به عنوان درصدی از تعداد کل سلول ها در این زمینه ها بیان شد.

پیوند سلولی

سلول های بدست آمده از 4 اهداکننده ی انسانی، برای آزمایشات پیوند سلولی مورد استفاده قرار گرفت. اولین یاخته های بنیادی مزانشیمی انسانیِ عبوری در چگالی پایین در DMEM با FBS 10 درصد پوشانده شدند. 2 الی 5 روز بعد، سلول ها با سرم فاقد DMEM شستشو شده و مشابه با AdRSlacz با MOI 1000 آلوده شدند. مایع رویی برداشته شد و سلول ها با DMEM با FBS 10 درصد شستشو داده شدند. این محیط کشت طی دو روز برای اطمینان از حذف ذرات ویروسی و اجازه برای درونی سازیِ هر گونه ذرات ویروسیِ باقیمانده روی سطح، چندین بار تغییر کرد. ( 5 روز ). در روز تشریح، سلول ها با EDTA-تریپسین 0/02 درصد برداشت شده و با PBS شسته شدند. سلول ها تا زمانی که کاشت و القا شوند معمولا طی 20 دقیقه روی یخ نگهداری می شوند.

سرکوب ایمنی موش نر بالغ ( که 4 تا 10 5فته سن دارد ) به عنوان گیرنده مورد استفاده قرار می گیرد.این سلول ها فاقد توانایی ایجاد پاسخ ایمنی انطباقی، واسطه ی سلولی T یا B و همچنین فقدان فعالیت سلولی کشنده ی طبیعی عملکردی می باشند. تمام روش های جراحی و حمل و نقل حیوان در توافق نامه ی مراقبت از حیوانات دانشگاه جانزهاپکینز و بررسی کمیته ی بهره برداری و دستورالعمل نهادی، بکار گرفته شد. متوکسی فلوران برای بیهوشی عمومی مورد ستفاده قرار می گیرد. حجم 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی حاوی 500000 یا یک میلیون سلول با یک سوزن به بطن چپ تزریق شد. هنگامیکه جریان برگشتی خون در سرنگ مشاهده شد، سوزن به میزان یک میلی متر دورتر پیشروی کرد و سوسپانسیون سلولی به آرامی تزریق شد. سپس برش دیواره ی شکم با بخیه ی ابریشمی بسته شد. کسری از سلول ها برای تزریقِ دوباره پوشانده شد و به طور هیستوشیمی به منظور تثبیت حالت ادامه یافته ی بتاگالاکتوسیداز در 1 روز و 1 تا 2 ماه رنگ آمیزی شد.

ایمونوهیستوشیمی

16 حیوان، برای پیوند سلولی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته و با مصرف بیش از حد متوکسی فلوران در 30 دقیقه و 4 (n=3) ، 14 (n=3) ، 21 (n=2) ، 30 (n=4) و 60 (n=3) روز پس از جراحی کشته شدند. بافت شان شکافته شد و در ساکارزِ 30 درصد به مدت 4 ساعت نگهداری می شوند. بافت ها در TckocT –Tissue تعبیه شده، و 10 تا 16 میکرومتر قمت سرماسنج بدست آمد. طی برش دادن و تشریح قلب، سه بخش مجاور قطع شده و سرازیری های سرمازده به طور جداگانه قرار گرفتند. بخش میانی 3 ، برای رنگ آمیزی X-gal استفاده شد و بخش های مجاور در هر طرف برای ایمونوهیستوشیمی به عمل می آید. مقاطع بافتی برای رنگ آمیزی بتاگالاکتوسیداز ، با گلوتارآلدهید 0/2 درصد و فرمآلدهید 2 درصد به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق با استون یا استون/متانول استون/متانول 50 درصد تثبیت شده و سپس با PBS حاوی سرم بز حاوی سرم بز 5 درصدی انکوباسیون می شوند.

بخش های مشخص، به مدت 60 دقیقه با پادتن بتاگالاکتوسیداز پلی کلونال خرگوش در غلظت 10 گرم بر میلی لیتر در سرم یز 2 درصد در PBS و بدنبال آن FITC کنژوگه Ig G به مدت 45 دقیقه انکوباسیون می شود. پس از شستشوی کامل، آنتی بادی دوم برای 60 دقیقه ی اضافی اعمال شد که شامل یک پادتن مونوکلونال موش علیه دسمین، عضله ی مخطط، میوزین زنجیره سنگین، MyoD یا فسفولامبان می باشد. رنگ آمیزی تروپونین T قلبی با پادتن پلی کلونال بز انجام شد. در این مورد یک پادتنِ ( ضد بز ) TRITC کنژوگه شده برای شناسایی بتاگالاکتوسیداز بکار گرفته شد. تصویرسازی فلورسانس Zeiss Axiovert مجهز به میکروسکوپ کانفوکال Nikon PCM 200 انجام شد. در شرایط آزمایشگاهی تمایز میوژنی برای مقایسه، یاخته های بنیادی مزانشیمی انسانی که در ابتدا عبور می کنند برای آزمایشاتِ تمایزِ میوژنیِ اسکلتی با MyoD استفاده می شوند. سلول ها در محیط کشت پلاستی با تراکم بالا پوشانده می شوند و با MyoD روز بعد با آدنوویروس حاوی ژن MyoD انسان تحت کنترل پروموتر RSV آلوده می شوند. سلول ها در محیط کم سرم ( سرم 2 درصد اسب ) به مدت یک ماه نگهداری شده و به منظور ایمونوهیستوشیمی با همان آنتی بادی ها و همان روش گفته شده، فراوری می شوند.

نتایج

هدایت سلول بنیادی

آزمایشات اولیه ی برچسب گذاری نشان داد که یاخته های بنیادی مزانشیمی انسانی می توانند به طور کارآمد با استفاده از آدنوویروس های نوترکیب در MOL بالا، هدایت شود. پروموتر RSV نسبت به پروموتر CMV در بیان ژن lacZ در این سلول ها موثرتر است. برای AdRSVlaz ، حداکثر تعداد سلول های بیان کننده ی گالاکتوسیداز در MOI 1000 تا 1500 بدست آمد. این غلظت برای برچسب زنی سلول ها در آزمایشات کاشت استفاده شد. نمونه های hMSCs های هدایت یافته،که در محیط کشت نگهداری شدند نشان داد که تعداد سلول های بیان کننده ی بتاگالاکتوسیداز در یک ماه 90 درصد و در دو ماه 60 درصد بود.

پیوند آزمایشگاهی سلول های بنیادی

هدف از این آزمایشات ارزیابی توانایی hMSc ها برای پیوند و افتراق در قلب بزرگسالان است. برای این کار 5_10⁵ و 10_10⁵ یاخته های بنیادی مزانشیمی انسانی برچسب زده شده با AdRSVIacZ از طریق دیافراگم به داخل بطن چپ موشِ دارای نقص ایمنی تزریق شد. 4 روز بعد از تزریق، بیشتر سلول های بتا گالاکتوسیداز مثبت در طحال، کبد و ریه مشخص شدند. از 16 حیوان، در 4 حیوان هیچ hMSc ای در قلب شناسایی نشد که احتمالا بخاطر مشکلات فنی مرتبط با تزریق در قلبِ در حالِ تپش بود. در 12 حیوان، hMSc ها در سراسر عضله قلب به صورت سلول های فردی در 4 تا 60 روز پراکنده شدند. مقدار hMSc های بتا گالاکتوسیداز مثبت از بخش های سر به طور تخمینی نشان داد که از 500000 سلول hMSc 2200 در بطن چپ تا مدت 4 روز پس از جراحی زنده می مانند. hMSc های کمتری در قلب در نقاط زمانیِ بعد شناسایی شد. اما_در هر قسمت بافت تقریبا یک عدد سلول بتا گالاکتوسیداز مثبت یافت شد.

با گذشت زمان بیشتر سلول های بتا گالاکتوسیداز مثبت به طور مورفولوژی از اطراف قلب ( کاردیومیوسیت ) غیر قابل تشخیص می شوند. برچسب زنی آنتی-بتاگالاکتوسیداز (فلورئسین سبز ) و تروپونین T قلبی ( رودامین قرمز ) در 14 روز انجام می شود. سلول های بتا گالاکتوسیداز مثبت نیز برای آلفا اکتنین مثبت بودند. یک جزء از گروه های Z در 60 روز نشان داده شده است. به طور مشابه سلولِ پیوند یافته برای MHC مثبت بودند. hMSc های پیوند یافته برای بیان فسفولامبین یافت می شوند که فسفوپروتئینی ست که نقشی کلیدی در تعدیل شبکه ی سارکوپلاسمی قلبی ATP-Ca₂O- آز دارد. تصویرسازی با بزرگ نمایی بالا از این سلول ها، سازماندهی سارکومری آلفا اکتنین، تروپونین T قلبی و دسمین را نشان داد. هیچ یک از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانیِ مشخص شده در بخش های قلب، با پادتن MyoD واکنش ندارند. برای تشخیص بیشترین تمایز میوژنی قلبی و اسکلتی hMSc های کاشت شده در قلب، به تجزیه تحلیل و آنالیز بیان این نشانگرها به نشانگرهای بیان شده در میولوله ها که توسط hMSc های هدایتگر MyoD در شرایط آزمایشگاهی شکل گرفت، پرداختیم. hMSc های هدایت شده MyoD سطوح بالایی از MyoD نو هسته را پس از آلودگی با AdRSV MyoD نشان دادند. بعد از انتقال MyoD ، hMSc های مجاوز ذوب شده و میولوله های چند هسته ای را تشکیل می دهند. در یک ماه، سلول های تمایز یافته، دسمین، آلفا اکتنین و بتا MHC را بیان می کنند اما هیچ سطح غیر قابل تشخیصی از فسفولامبان یا تروپونین قلبی T مشاهده نشد. مجددا سازماندهی سارکومری پروتئین های انقباضی با بزرگنمایی بالا نشان دهنده ی تمایز میولوله ی بالغ بود.

بحث

روش جداسازیِ hMSc ها از مغز استخوان بزرگسال که در این مطالعه مورد استفاده قرار گرفته است موجب ایجاد یک جمعیت سلولی همگن شده که قادر به تمایز چندین اجداد مزانشیمی می باشد. در 4 روز اظهار شد که هیچ یک از سلول های بتاگالاکتوسیداز مثبت دسمین را بیان نکردند، hMSc ها به سرعت در محل تزریق سوزنِ سرنگ یافت شدند اما در زمان های بعدی hMSc های بازمانده بیشتر به صورت تکی پراکنده شدند. این سلول های مقاوم، دور از محل سوزن سورنگ یافت شد و به احتمال زیاد از طریق عبور از اندوتلیوم وارد میوکارد می شوند، اگرچه شواهد مستقیمی در این باره موجود نیست. این فرایند ممکن است شبیه به راندن لوکوسیت ها به اندوتلیوم بوده و شامل اینتگرین و سایر ملکول های چسبنده ی موجود در سطح hMSc ها می باشد. به علاوه اتصال مویرگی ممکن است نقش مهمی در افزایش نفوذپذیری اندوتلیال داشته باشد. مهاجرت ترانس اندوتلیال از مویرگ های عروق کرونر و ادغام سلول ها به عضله ی قلب موش قبلا با میوبلاست ها و سلول های مشتق شده از مغز استخوان مشاهده شده است. به طور شفاف درک بیشتر این مکانیسم ها از مهاجرت و تمرکز سلولی ممکن است ارائه ی موثرتر میوکارد hMSc ها میسر سازد.

دسمین به عنوان نشانگر اولیه برای تمایز میوژنی سنتز شده توسط سلول های پیش ساز عضلانی، شناخته می شود. در این آزمایش ها هیچ یک از hMSc های پیوند شده دسمین را در 4 روز بیان نکردند در حالیکه در 60 روز تمام سلول های بتاگالاکتوسیداز مثبتِ قابل تشخیص، بیان می کنند.

hMSc ها همچنین تروپونین T قلبی ، بتا-MHC ، آلفا اکتنین و فسفولامبین و گره های سارکومری در بزرگنمایی بالا مشهود بودند. به میزان قابل توجهی شدت ایمونوهیستوشیمی برای این پروتئین ها در hMSc های پیوندی از اطراف قلب غیر قابل تشخیص است.

بیان نشانگرهای میوژنی در سلول های پیوند یافته با بیان موجود در میولوله های بدست آمده توسط hMSc های بیان کننده ی MyoD در شرایط آزمایشگاهی مقایسه شد. نشان داده شد که بیان اجباری MyoD در سلول های بنیادی مزودرمی باعث شکل گیری میولوله از هر دو نوع انقباض کند و تند شده و از آن هایی که توسط میوبلاست های اولیه تشکیل شده اند ، غیر قابل تشخیص است. hMSc های انتقال دهنده ی MyoD ، دسمین، آلفا اکتنین و بتا – MHC را بیان می کند اما هیچ فسفولامبان یا تروپونین قلبی ای تشخیص داده نشد، دو پروتئین سازنده عمدتا به عضله ی قلبی محدود می شوند. این اطلاعات همراه با هم دلالت بر تبدیل hMSC های پیوند یافته به عضله ی قلبی به جای عضله ی اسکلتیِ کند انقباض دارد. با این که از لحاظ نظری امکان تبدیل hMSC ها به فنوتیپ عضله ی اسکلتی و سپس انطباق با محیط قلبی همانطور که برای سلول های C₂C₁₂ پیشنهاد شد وجود دارد، اما با توجه به داده ها و اطلاعات داده شده این امکان بعید یافت شد.

سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان و همچنین کاردیوسیت ها ( قلب ) از مزودرم اولیه مشتق شده اند. گرچه از مناطق مختلف جنینی شکل گرفته اند. سلول های پیش ساز کاردیومایوسیت از یک بخش واقع در مزودرم تشکیل شده که تحت تاثیر عوامل تمایزِ مترشحه از اندودرم مجاور سرنوشتشان تغییر می کند. قلب بزرگسالان به طور فعال فاکتور رشد شبه انسولین را ترشح می کند ، فاکتور رشد بتا (TGF)- را تبدیل کرده و فاکتور رشد اپیدرمیِ اتصال هپارین که به عنوان محرک رشد اتوکرین برای قلب عمل می کند. TGF برای القاء تمایز قلبی در خط سلولی مزودرمی جنینی مرغ نشان داده شد و بتا – TGF علامت دهنده ی اکتیوینِ ملکولی در پیدایش قلب دوزیستان و پرندگان مشارکت دارد. تولید نوروگلین ها موجب ترویج بقا و رشد میوسیت قلبی توسط گیرنده های ErbBZ و B4 که باعث اتصال فاکتورهای شبه رشد اپیدرمی هپارین می شود. در مطالعه ی حاضر فرایند تمایز در داخل بدن مشاهده شد که به احتمال زیاد شامل ترکیبی از سیگنال های رشد پاراکرین و محرک های الکتریکی و مکانیکیِ موجود در قلب بزرگسالان می باشد.

گزارشات اخیر از قابلیت سلول های مغز برای مهاجرت از مغز استخوان و یکپارچه سازی و تمایز به ماهیچه های اسکلتیِ آسیب دیده و ماهیچه ی قلبی نشان داد که این فرایندها به طور معمول به ترمیم و نگهداری بافت یا بازسازی کمک می کنند گرچه این فرآیندها ممکن است کارامد نباشند. سایر گزارش های اخیر پتانسیل موش یا سلول های مغز موش را برای پیوند یا جاسازی در میوکارد قلب نشان داد و حمایت های بیشتری در رابطه با این امکان ارائه داد.

مطالعات حاضر قابلیت های hMSC های بزرگسال را در رابطه با ادغام و تحت تمایز عضله ی مخطط قرار گرفتن در قلب بزرگسالان و امکان استفاده از این سلول های بنیادی بالغ انسان را برای کاردیومیوپلاستیِ درمانی فراهم کرد.

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

دانلود پاورپوینت حوزه های آبریز و خصوصیات آنها

دانلود پاورپوینت حوزه های آبریز و خصوصیات آنها

پاورپوینت حوزه های آبریز و خصوصیات آنها نوع فایل : پاورپوینت تعداد اسلایدها : 28

دانلود طرح توجیهی تحقیقی کاشت و پرورش موز

دانلود طرح توجیهی تحقیقی کاشت و پرورش موز

طرح توجیهی تحقیقی کاشت و پرورش موز نوع فایل : Word تعداد صفحات : 32

دانلود پاورپوینت جنگل ها

دانلود پاورپوینت جنگل ها

پاورپوینت جنگل ها تعداد اسلایدها : 15 صفحه PowerPoint قابل ویرایش

طرح توجیهی تولیدی ,مالی و اقتصادی پرورش قارچ خوراکی

طرح توجیهی تولیدی ,مالی و اقتصادی پرورش قارچ خوراکی

طرح توجیهی تولیدی ,مالی و اقتصادی پرورش قارچ خوراکی

دلفین ها

تعداد صفحه : 24

فرمت : WORD

افرادی که با دلفین ها شنا میکنند،امواج مغزی شان الگوی یکسان و هماهنگی پیدا میکنند،همانند کسانی که مدتها مدی تیشن کرده اند حتی اگر سابقه ی آنرا نداشته باشند. دلفین ها می توانند مثل یک پرستار خوب و مهربان باشند .اغلب مربیان تصدیق می کنند که دلفین ها از حیوانات سیرک فهیم ترند و این مربیان حداقل یک تجربه ی روحی یا استثنایی با دلفین ها داشته اند.در طی قرن ها ، بارها گزارش شده است که دلفین ها  جان ماهی گیران را در دریا نجات و یا محل ماهی ها را به آنان نشان داده اند

 در قبیله ای در آفریقا نقشه ی جالبی از مو قعیت ها ی ستاره ها وجود دارد که بدون هیچ گونه ابزاری برای رصد کردن تهیه شده است . افراد این قبیله در پاسخ به این پرسش که چگونه چنین چیزی ممکن است می گویند طبق افسانه های قبیله،این دانسته ها توسط دلفین ها در ذهن اجدادشان تداعی شده است. در کشور یونان خانه های وقف شده ای وجود دارد که به خانه ی دلفین معروفند. در استرالیا یک گروه بومی خود را رویای دلفین می نامند

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

کبک ها

تعداد صفحه : 15

فرمت : WORD

به هنگام احساس خطر، از کوهها به سرعت بالا می دود و معمولا این کار را به پرواز ترجیح میدهد. گوشت این پرنده بسیار خوشمزه و به لحاظ ارزش غذایی نسبت به دیگر طیور از موقعیت ممتازی برخوردار است

این پرنده معمولا دارای پوششی با پرهای خاکستری است و گلولی نخودی رنگ با نوار حاشیه های پهن سیاه بوده و از زیر شکم و پهلو ها خالهای کشیده زیبایی به چشم می خورد. پاها و منقارش سرخ رنگ است و نر و ماده لحاظ شکل ظاهری تفاوت چندتنی با یکدیگر ندارند

کبک نر به طور عمومی بزرگتر از ماده میشود، در حالی که سر ماده بیضی شکل میباشد، هم کبک ماده و هم نر در پشت پاها بر آمدگی شبیه میخ دارند که در نرها برآمدگی بزرگتر میباشد

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

پرورش شتر مرغ

تعداد صفحه :  20

فرمت : WORD

مطابق جدول زمانی ارائه شده با خرید 2 قطعه شتر مرغ نر و 5 قطعه شتر مرغ ماده و خرید 10 قطعه شتر مرغ یک ساله و خرید 125 تخم شتر مرغ فعالیت پرورشی شروع شده و در سال اول تعداد شتر مرغ های مولد را افزایش می دهیم تا بتوانیم ظرفیت مزرعه را به 200 قطعه برسانیم ، که در نهایت در پایان سال پنجم مزرعه به ظرفیت کامل می رسد

پرورش شتر مرغ دارای مراحلی به قرار زیر است

1. خرید شتر مرغ های مولد و یکساله و تخم تشر مرغ
2. ایجاد تأسیسات و ساختانهای جهت نگهداری شتر مرغ
3. ایجاد مزرعه شتر مرغ جهت تغذیه شتر مرغ ها

 

1- شتر مرغ های خریداری شده برای شروع کار

ردیف	نوع شتر مرغ ها	تعداد
1	شتر مرغ بالغ نر	2
2	شتر مرغ بالغ ماده	5
3	شتر مرغ یکساله	10
4	تخم شتر مرغ	125

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

پرورش ماهی

تعداد صفحه : 36

فرمت : WORD

ماهی جانوری خونسرد است و جهت حفظ درجه حرارت بدن خود ، مجبور به صرف انرژی نیست ، بدین لحاظ ، یک ماهی نسبت به یک جانور خونگرم ، از لحاظ تبدیل مواد غذایی به پروتئین بدن ، از کارآیی و استعداد بیشتری برخوردار است

تغذیه ماهیان انرژی مورد نیاز ماهی از غذا تأمین میشود ، بهر حال این انرژی در اصل از خورشید تولید می شود . انرژی خورشید به وسیله گیاهانی که برای ساختن کربوئیدرات ها، انرژی مصرف می نمایند، به غذا تبدیل می گردد. جانوران این گیاهان را خورده و انرژی ذخیره شده را جهت انجام فعالیت های خود مورد استفاده قرار می دهند ، بنابراین گیاهان بعنوان تولیدکنندگان اولیه مواد غذایی شناخته شده اند ، که این مواد به صور دیگر تبدیل می گردد و سپس در اختیار ماهیان قرار می گیرد. در زیر بطور فشرده نیازهای غذایی ماهیان مورد اشاره قرار می گیرد

ترکیبات معدنی ماهـیان از مـواد مـعدنی بیشماری استفاده می نمایند که عناصر ذیل ضرورت بیشتری برای آنان دارد که عبارتند از : کلسیم ، فسفر ، سدیم ، مولیبدن ، کلر، منیزیم، آهن، سلینیوم، ید، منگنز، مس، کبالت و روی که عوامل یاد شده از طریق محصولات جنبی کشتارگاهها همچون پودر ماهی در اختیار ماهیان قرار می گیرد
ترکیبات آلی که خود شامل مواد زیر هستند: پروتئین ها پروتئین ها ترکیبات آلی پیچیده ای هستند که از واحدهای اسید آمینه ساخته شده اند و از طریق اسیدهای دیواره روده به داخل خون جذب و یا جهت تولید انرژی می سوزند. منابع گیاهی و غالباً حیوانی در تأمین پروتئین مصرفی ، در جیره غذایی مصرفی ، تغذیه مصنوعی پرورش دهندگان گنجانده می شود. چربیها این مواد از واحدهای اصلی به نام اسیدهای چرب تشکیل می شوند . اطلاعات در مورد جزئیات نیاز ماهی به چربی در دست نیست، لذا در غذاهای ویژه مصنوعی اهمیتشان در درجه دوم قرار دارد. ئیدرات های کربن این مواد شامل گروه وسیعی از مواد شامل قندها، نشاسته ها و سلولز هستند، ساده ترین ئیدرات های کربن، قندها و پیچیده ترین آنها پلی ساکاریدها است .

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

شکم پایان

تعداد صفحه : 20

فرمت : WORD

اساسی تقسیم بندی جدید به وسیلة‌ دانشمندی فرانسوی پایه گذار شد و او بر اساس شباهت قسمتهای نرم و قسمتهای سخت، نرم تنان را به سه رده تقسیم بندی کرده که عبارتند از: گاستروپودار، سفالوپودا و دو کفه‌ای‌ها

صور مشخصة نرم تنان عبارت است از

1- عدم بند بند بودن بدن

2- تقارن ارگانیسم بدن نسبت به یک صفحه

3- مرکزیت عضو حساس در سر (به استثناء پلسی پودا)

4- پوشیده شدن بدن به وسیله پوست

5- خواص اختصاصی دستگاه گوارش و سیستم عصبی

6- صور مشخص در حالات لاروی

پوست دارای سلول‌هایی است که غشاء را ترشح می‌کند. غشاء در کلیة نرم تنان از کربنات کلسیم ساخته شده و تمام یا قسمتی از آن به صورت کلیست یا آراگونیت است. معمولاً غشاء خارجی گاهی کاملاً داخلی است

ردة گاستروپودا: بدن معمولاً در یک غشاء مارپیچ غیرمتقارن قرار دارد. سر مشخص و دارای یک یا دو زوج Tentacle و یک زوج چشم است. پا عریض و مسطح است ولی در انواع شناگر به شکل بال مانندی در می‌آید

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

مورچه ‌ها

تعداد صفحه : 33

فرمت : WORD

سیکل زندگی: در طول پرواز نکاحی مورچه‌ها، هنگامی که نرها و ماده‌های بالدار جفت می‌شوند و جفت‌گیری می‌کنند، بعداً اسپرم به ماده‌ها منتقل می‌شوند و نرها به سرعت می‌میرند. ماده‌ها به زمین می‌آیند و یک جای مناسب برای لانه‌گزینی انتخاب می‌کنند بالهایشان از دست داده و شروع به تخم‌گذاری می‌کنند. اولین نسل لاروها به وسیلة ملکه غذادهی و مراقبت می‌شوند. و کارگرهای عقیم مورچه‌ها پیشرفت می‌کنند. بعداً تنها نقش آن تخم‌گذاری است

مورچه‌های کارگر از ملکه و نوزادان (تخم‌ها، لارو، پوپ) مراقبت می‌کنند. لانه را به وجود می‌آورند و از آن نگهداری می‌کنند. از کلنی دفاع می‌کنند و برای غذا به جستجو می‌پردازند

شکل کلنی مورچه‌های آتشین وارده: شکل بالدار که دارای قدرت تولید مثل هستند در تپه‌ها زندگی می‌کنند تا زمانی که آنها به پرواز جفت‌گیری مباردت ورزند اغلب در بعد از ظهر زود و بعد از بارندگی اتفاق می‌افتد. نرها بعد از جفت‌گیری می‌میرند در حالیکه ملکه‌های باردار شده پایین می‌آیند که یک مکان مناسب جهت کلنی جدید پیدا کنند. بعضی اوقات چندین ملکه یک حفره‌ای حفر می کنند که یک کلنی جدید را شروع کنند

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

جذب نور در تاریکی با الگو از چشم گربه

تعداد صفحه : 28

فرمت : WORD

فهرست

 

مقدمه ................................

آناتومی چشم ..........................

اجزای چشم ............................

پلکها ................................

ملتحمه ...............................

صلبیه ................................

قرنیه ................................

عنبیه ................................

مردمک ................................

جسم مژگانی ...........................

بخش یووه‌آ ............................

عدسی .................................

زلالیه ................................

زجاجیه ...............................

مشیمیه ...............................

شبکیه ................................

چشمان گربه ...........................

حس بینایی گربه .......................

گربه‌ها چگونه در تاریکی می‌بینند؟ ......

تفاوت چشم گربه‌ها .....................

تطابق چشمان گربه .....................

نتیجه‌گیری ............................

ضمیمه ................................

منابع ................................

جهت دانلود محصول اینجا کلیک نمایید

اصول ام آر آی

اصول ام آر آی

دانلود تحقیق زنبور عسل

دانلود تحقیق زنبور عسل

تحقیق زنبور عسل نوع فایل : Word تعداد صفحات : 7

دانلود تحقیق فتوسنتز Photosynthesis

دانلود تحقیق فتوسنتز Photosynthesis

تحقیق فتوسنتز Photosynthesis نوع فایل : Word تعداد صفحات : 10

اطلس کامل آناتومی و تشریح بدن انسان

اطلس کامل آناتومی و تشریح بدن انسان

قیمت: 25,000 تومان

ACLAND Human Anatomy

مجموعه " اطلس کامل آناتومی تشریح بدن انسان " یا "

مجموعه آناتومی آکلند " جدید ترین و کامل ترین فیلم آموزشی

 تشریح و آناتومی بدن انسان است که تاکنون ساخته شده است. 

این مجموعه که شامل 6 DVD میباشد، به بررسی کامل قسمتهای

 مختلف بدن بطور مجزا با تفکیک لایه لایه هر عضو می پردازد.

استفاده از مدل های واقعی و تکنیک های نوین 

فیلمبرداری جهت نمایش کامل هر عضو، بهمراه توضیحات

 کامل و تخصصی در طول فیلم، از ویژگی های این 

مجموعه استثنایی است . 

این مجموعه بسیار کامل و فوق العاده که در قالب

 6 DVD آماده شده است ، شامل قسمت های زیر است:

دیسک 1 :

The Upper Extremity

دیسک 2 :

The Lower Extremity

دیسک 3 :

The Trunk

دیسک 4 :

(The Head and Neck (Part 1

دیسک 5 :

(The Head and Neck (Part 2

دیسک 6 :

The Internal Organs

تماشای این مستند را به کلیه دانشجویان و فارغ التحصیلان

 علوم پزشکی توصیه می کنیم

زبان : انگلیسی

کیفیت : DVD ( قابل پخش در کامپیوتر و DVD Player های خانگی )

محصول : NORTON HEALTHCARE  - LIPPINCOTT WILLIAMS & WILKINS

این مجموعه بر روی مرغوب ترین دیسک های بازار ، 

با قاب DVD ، کاور رنگی اختصاصی و همچنین چاپ رنگی 

بر روی دیسک DVD بصورت اورجینال ، در سریع ترین 

زمان ممکن برای شما ارسال خواهد شد.

ارسال در تهران با پیک 1 روزه
و برای شهرستان با پست پیشتاز 2 روزه
پست سفارشی 7 روزه

زبان : انگلیسی

کیفیت : DVD ( قابل پخش در کامپیوتر و DVD Player های خانگی )

محصول : NORTON HEALTHCARE  - LIPPINCOTT WILLIAMS & WILKINS

      

انواع سنگ های رسوبی

انواع سنگ های رسوبی

تحقیق رشته زمین شناسی، پیشگفتار: سنگ های رسوبی بیش از هفتاد و پنج درصدسطح زمین را می پوشانند. یک توده رسوبی شامل موادی است که در سطح یا نزدیک سطح زمین و در محیطی که دارای فشار و حرارت پایین می باشد، انباشته می‌گردد. معمولاً مواد رسوبی از مایعی که آن ها را در بر می گیرد، در محیط های مختلف رسوبی ته ..

پاورپوینت فصل چهارم فیزیولوژی دستگاه عصبی

پاورپوینت فصل چهارم فیزیولوژی دستگاه عصبی

فیزیولوژی دستگاه عصبی

دانلود پاورپوینت اخلاق پزشکی در اسلام

دانلود پاورپوینت اخلاق پزشکی در اسلام

دانلود پاورپوینت اخلاق پزشکی در اسلام